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細(xì)胞培養(yǎng)概念：是一種在體外模擬體內(nèi)環(huán)境的方法，?通過提供無菌、?適宜溫度、?酸堿度和一定營養(yǎng)條件等，?使細(xì)胞能夠生存、?生長、?繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種技術(shù)。?這種技術(shù)不僅在生物學(xué)研究中扮演著重要角色，?而且在醫(yī)學(xué)、?農(nóng)業(yè)科學(xué)等領(lǐng)域也有廣泛應(yīng)用。?細(xì)胞培養(yǎng)也被稱為細(xì)胞克隆技術(shù)，?是生物工程技術(shù)中核心、?基礎(chǔ)的技術(shù)之一。

體外細(xì)胞共培養(yǎng)（co-culture)概念：是將兩種細(xì)胞（可以來自同一種組織，也可以來自不同的組織）混合共同培養(yǎng)，從而使其中一種細(xì)胞的形態(tài)和功能穩(wěn)定表達(dá)，并維持較長時間。該技術(shù)能模擬體內(nèi)生成的微環(huán)境，便于更好地觀察細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與培養(yǎng)環(huán)境之間的相互作用以及探討藥物的作用機(jī)制和可能作用的靶點(diǎn)，填補(bǔ)了單層細(xì)胞培養(yǎng)和整體動物實(shí)驗(yàn)的鴻溝。

體外細(xì)胞加藥培養(yǎng)概念：此試驗(yàn)非常適合藥物作用機(jī)理的研究，能初步快速有效的探究化合物/藥物的功能和相關(guān)信號通路，在具體研究工作中，經(jīng)常將細(xì)胞試驗(yàn)與整體試驗(yàn)有機(jī)結(jié)合，從不同角度分析藥物的作用和機(jī)理，能起到相互補(bǔ)充，相互印證的極好效果。

實(shí)驗(yàn)流程：

1、細(xì)胞復(fù)蘇

將凍存細(xì)胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動促進(jìn)其融化。將融化的細(xì)胞移入離心管中，加入370C預(yù)熱的DMEM完全培養(yǎng)基中(其中胎牛血清約為10%)，輕輕吹勻，離心，500g離心2min，棄上清液。加入DMEM完全培養(yǎng)基清洗，棄上清液。

加入DMEM完全培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻，制成細(xì)胞懸液，接種于培養(yǎng)皿/瓶中，在含5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2、細(xì)胞傳代

當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%(過早產(chǎn)量不足，過晚細(xì)胞狀態(tài)不佳，1:2至1:10以上的比率傳代培養(yǎng)，一般1:3至1:5細(xì)胞一代，即從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段時間，非細(xì)胞有絲分裂次數(shù))時，去掉完全培養(yǎng)基，用1X PBS清洗2次。

加入胰蛋白酶(注意:消化液的量以蓋住細(xì)胞最好，最佳消化溫度是370C。顯微鏡下觀察細(xì)胞:倒置顯微鏡下觀察消化細(xì)胞，若胞質(zhì)回縮，細(xì)胞之間不再連接成片，表明此時細(xì)胞消化適度)進(jìn)行消化，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中約2-3min。

加入適量DMEM完全培養(yǎng)基終止胰蛋白酶消化，轉(zhuǎn)移至離心管后500g離心2min，棄上清，再加入DMEM完全培養(yǎng)基清洗，棄上清液。

加入DMEM完全培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻，吸取10微升進(jìn)行計(jì)數(shù)，然后按照所需細(xì)胞量在含5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

3、細(xì)胞凍存

當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時，去掉完全培養(yǎng)基，用1XPBS清洗2次。加入胰蛋白酶進(jìn)行消化，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中約2-3min。加入DMEM完全培養(yǎng)基終止胰蛋白酶消化，轉(zhuǎn)移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM完全培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入lml凍存液(90%胎牛血清，10% DMSO。

一般來講血清含量可以在10%-90%之間調(diào)整，凍存波中加入血清一方面可以為細(xì)胞提供營養(yǎng)，另一方面可以在細(xì)胞凍存過程中提供非滲透性保護(hù)物質(zhì)，如蔗糖，白蛋白等從而更好地保護(hù)細(xì)胞)，放入凍存管內(nèi)(管內(nèi)有異丙醇，以保證溫度降低的速度)，立即放入40C冰箱中凍存30min，然后放入-200C冰箱中凍存30min，再置于-80℃冰箱內(nèi)過夜。第二天放入液氨中，可以保存至少兩年，如不放人波氮，可以保存三個月。

細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的原則是:慢凍速融，這樣更加有利于保持細(xì)胞的活力，凍存細(xì)胞不加任何保護(hù)劑，會導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生，從而使細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機(jī)械損傷，引起細(xì)胞內(nèi)環(huán)境滲透壓，PH，電解質(zhì)等的改變，進(jìn)而促使細(xì)胞死亡

服務(wù)流程：

1、提供詳細(xì)實(shí)驗(yàn)方案。

2、接收樣本。

3、培養(yǎng)傳代細(xì)胞。

4、細(xì)胞計(jì)數(shù)，接種細(xì)胞。

5、根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求干預(yù)處理細(xì)胞。

6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行后續(xù)檢測。

樣本要求及運(yùn)輸條件：

1、客戶提供細(xì)胞樣本：

（1）傳代培養(yǎng)的細(xì)胞，需告知細(xì)胞名稱、培養(yǎng)條件等基本信息，無細(xì)胞名稱的細(xì)胞將不提供凍存服務(wù)，無培養(yǎng)條件的細(xì)胞將無法提供及時的傳代培養(yǎng)等操作。

（2）寄送凍存細(xì)胞需用充足干冰保存運(yùn)輸。

（3）寄送培養(yǎng)細(xì)胞需擰緊培養(yǎng)瓶（不透氣瓶蓋），裝滿培養(yǎng)基，封口膜封好，常溫運(yùn)輸，嚴(yán)禁冰凍。

（4）細(xì)胞狀態(tài)以收到細(xì)胞后的觀察狀態(tài)為準(zhǔn)。

2、客戶提供實(shí)驗(yàn)中的相關(guān)試劑：

（1）提供試劑貨號、保質(zhì)期、保存條件等基本信息。

（2）配制好的試劑需提供名稱、濃度、安全性等信息。

（3）不接收具傳染性的樣本、試劑藥物等等；不接收有生物危害的樣本；不接收有致病性的樣本。