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細胞ROS/JC-1/鈣離子檢測

細胞ROS/JC-1/鈣離子檢測

概念:

活性氧(ROS)是含氧自由基和易形成自由基的過氧化物。

ROS是正常代謝的天然副產物,并且在細胞信號傳導和體內平衡中具有重要作用。但在環(huán)境壓力脅迫下(如輻射、強氧化物處理等),ROS水平會急劇增加,從而對細胞結構造成嚴重損害,被稱為氧化應激。

線粒體在呼吸產生能量時會將電勢能儲存在線粒體內膜。內膜兩側的氫離子及其他離子濃度的不對稱形成了線粒體膜電位。細胞受到凋亡誘導后線粒體內膜通透性增加,線粒體膜電位下降。

鈣(Calcium)是哺乳動物體內最為豐富的礦物質。鈣離子參與調控很多細胞生命活動過程,包括肌肉收縮、細胞粘附、激素/神經遞質釋放、糖原代謝、細胞增殖/分化、血凝、神經或突觸傳遞以及骨骼結構支持在內的大量生理過程。

原理與方法:

ROS:DCFH-DA本身無熒光,可透過細胞膜。進入細胞內被胞內的酯酶水解生成DCFH,失去細胞膜通透性,從而積聚在細胞內。細胞內的活性氧能將無熒光的DCFH氧化成有綠色熒光的DCF。通過檢測熒光強度可反映活性氧的水平。

JC-1:正常情況下,JC-1在線粒體基質中形成聚合物,發(fā)紅色熒光;而凋亡線粒體由于膜電位下降或喪失,JC-1以單體的形式存在于胞漿中,產生綠色熒光。JC-1顏色的變化能直接反映線粒體膜電位。

鈣離子:Fluo-3AM和Fluo-4AM是常用的檢測細胞內鈣離子濃度的熒光探針。熒光染料可以穿透細胞膜,本身熒光非常弱,其熒光不會隨鈣離子濃度升高而增強。進入細胞后,可以被細胞內的酯酶剪切形成Fluo-3或Fluo-4,從而被滯留在細胞內,可以和鈣離子結合,產生較強的熒光。


                                                                    ROS檢測


                                                     JC-1檢測


                                                     鈣離子檢測