細胞實驗檢測
細胞劃痕
一、實驗概念
細胞劃痕實驗是一種操作簡單，經濟實惠的研究細胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗方法。這種方法的原理是，當細胞長到融合成單層狀態時，在融合的單層細胞上人為制造一個空白區域，稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區域使“劃痕”愈合。基本的步驟包括“劃痕”的制造，細胞遷移期間圖像的獲得以及后期數據的處理。
二、實驗流程
細胞板畫線→接種細胞→用槍頭制造劃痕→培養適當時間進行拍照
三、注意事項
1.流式檢測樣本 |
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樣本形式 | 處理方式 |
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血樣 | 當天采集的血液，置于抗凝管中，建議血量≥2mL，單個血樣對應分組較多時應適當加大采血量 | 4小時之內完成淋巴細胞分離 |
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組織 | 新鮮標本離體后置于PBS中，4℃保存運輸。離體時間不可超過24小時。 |
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細胞 | 武漢本地客戶可以將培養細胞的孔板交予銷售帶至實驗室，需要用封口膜密封，防止漏液。外地客戶需將有活力的細胞置于培養瓶中常溫快遞至公司檢測 |
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注意事項： |
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2.其他檢測 |
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檢測形式 | 處理方式 | 保存 | 運輸 |
流式細胞周期檢測 | 將細胞正常消化后，冷PBS懸浮細胞，之后緩慢加入4℃預冷無水乙醇固定，乙醇終濃度75% | -20℃ | 冰袋 |
流式細胞凋亡檢測 | 將細胞正常消化后，PBS洗一遍，PBS重懸 | 必須當天送樣 | 冰袋 |
Tunel細胞凋亡檢測 | 有活力的細胞，棄去培養液，PBS沖洗后，加入足量4%多聚甲醛，培養板附上保鮮膜，蓋上板蓋，膠布纏裹固定，避免固定液體流出 | 4℃ | 冰袋 |
原代分離實驗 | 無菌采取完整的組織塊，新鮮組織離體后置于無菌培養基中 | 離體時間不可超過4小時 | 冰袋 |
血小板的分離 | 需要選擇醫用真空采血管獲得抗凝血，全過程樣本均需在20±2℃的條件下進行。為獲得實驗結果，最好在取血2h內進行實驗，血液存放時間越長，細胞分離效果越差。血液放置超過6h后分離效果更差甚至不能達到分離目的。 | 4℃ | 冰袋 |